一、公司介紹

AppliedCell上海埃澤思生物是深耕細(xì)胞生物學(xué)、再生醫(yī)學(xué)、細(xì)胞治療上游原料研發(fā)與規(guī)模化生產(chǎn)的生物科技企業(yè)，企業(yè)擁有完整自主研發(fā)體系與標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)管控體系，業(yè)務(wù)覆蓋基礎(chǔ)生命科學(xué)研究、新藥研發(fā)、細(xì)胞藥物臨床前及臨床階段生產(chǎn)配套原料供給兩大板塊。企業(yè)已取得高新技術(shù)企業(yè)、專(zhuān)精特新中小企業(yè)相關(guān)資質(zhì)認(rèn)證，搭建符合GMP指導(dǎo)規(guī)范的獨(dú)立生產(chǎn)車(chē)間，配套完整理化、微生物、細(xì)胞生物學(xué)三級(jí)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室，覆蓋原料進(jìn)廠檢測(cè)、生產(chǎn)過(guò)程中控、成品出廠全流程檢驗(yàn)環(huán)節(jié)。

企業(yè)產(chǎn)品線覆蓋十六大細(xì)分品類(lèi)，適配間充質(zhì)干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、造血干細(xì)胞、原代組織細(xì)胞、類(lèi)器官、外泌體、腫瘤干細(xì)胞等主流研究模型，現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)化成品百余種，同時(shí)可為科研院所、生物醫(yī)藥生產(chǎn)企業(yè)提供配方定制、試劑OEM代工、細(xì)胞培養(yǎng)工藝優(yōu)化配套技術(shù)服務(wù)。企業(yè)核心產(chǎn)品完成國(guó)家藥品審評(píng)中心CDE原輔料備案，干細(xì)胞相關(guān)系列產(chǎn)品完成美國(guó)FDA DMF備案，多款試劑取得醫(yī)療器械相關(guān)備案資質(zhì)，可滿(mǎn)足細(xì)胞藥物IND申報(bào)、臨床級(jí)細(xì)胞制備、高校實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)科研等多場(chǎng)景合規(guī)使用需求。

企業(yè)搭建由發(fā)育生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物制藥工程、質(zhì)控檢驗(yàn)多專(zhuān)業(yè)人員組成的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，所有生產(chǎn)、檢驗(yàn)人員均完成標(biāo)準(zhǔn)化崗位培訓(xùn)，建立ISO9001質(zhì)量管理體系文件，完整留存每一批次產(chǎn)品生產(chǎn)記錄、檢驗(yàn)原始數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)成品全鏈路溯源。渠道合作方面，授權(quán)代理商為上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司，市場(chǎng)端全部標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品均可通過(guò)該代理商完成咨詢(xún)、樣品申領(lǐng)、批量采購(gòu)、售后技術(shù)對(duì)接全流程服務(wù)，無(wú)其他合作經(jīng)銷(xiāo)企業(yè)。

企業(yè)產(chǎn)品設(shè)計(jì)核心邏輯圍繞降低實(shí)驗(yàn)干擾、提升數(shù)據(jù)可重復(fù)性、適配合規(guī)申報(bào)三個(gè)方向，針對(duì)傳統(tǒng)血清類(lèi)試劑批次波動(dòng)、外源因子污染、內(nèi)毒素超標(biāo)、操作流程繁瑣等行業(yè)常見(jiàn)問(wèn)題完成配方迭代，所有無(wú)血清、無(wú)異源系列產(chǎn)品剔除動(dòng)物源蛋白組分，明確全部基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)、細(xì)胞因子、緩沖鹽組成成分，便于用戶(hù)開(kāi)展工藝審計(jì)、資料整理與藥物申報(bào)資料撰寫(xiě)。服務(wù)層面除標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品供給外，技術(shù)團(tuán)隊(duì)可根據(jù)用戶(hù)細(xì)胞類(lèi)型、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⑸a(chǎn)規(guī)模提供培養(yǎng)基選型、凍存方案優(yōu)化、細(xì)胞分化流程調(diào)試等免費(fèi)技術(shù)支持，降低用戶(hù)自主摸索實(shí)驗(yàn)條件的時(shí)間成本。

?? 下圖為上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司作為上海埃澤思生物Applied Cell授權(quán)代理商的授權(quán)書(shū)

 二、核心優(yōu)勢(shì)

 （一）配方體系優(yōu)勢(shì)

1. 分層配方矩陣設(shè)計(jì)，分為科研級(jí)、臨床前合規(guī)級(jí)、治療級(jí)三個(gè)產(chǎn)品梯度，用戶(hù)可根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景對(duì)應(yīng)選擇，無(wú)需額外調(diào)整基礎(chǔ)配方。科研級(jí)產(chǎn)品適配高校、科研機(jī)構(gòu)基礎(chǔ)細(xì)胞增殖、分化、機(jī)制探究實(shí)驗(yàn)；臨床前合規(guī)級(jí)適配藥企藥物篩選、動(dòng)物藥效試驗(yàn)；治療級(jí)產(chǎn)品滿(mǎn)足臨床細(xì)胞制劑制備、細(xì)胞藥物申報(bào)使用要求，內(nèi)毒素、微生物、外源病毒、支原體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)同步對(duì)標(biāo)藥典相關(guān)規(guī)范。

2. 無(wú)血清、無(wú)異源產(chǎn)品線組分全部明確，不添加成分未知的動(dòng)物提取物，全部活性組分采用重組蛋白、合成類(lèi)營(yíng)養(yǎng)原料，從源頭減少外源雜蛋白、未知病原體引入概率，批次間理化指標(biāo)、細(xì)胞培養(yǎng)效果波動(dòng)幅度可控，多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)偏差更小。

3. 針對(duì)不同組織來(lái)源細(xì)胞做定向配方優(yōu)化，臍帶、脂肪、骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞分別對(duì)應(yīng)專(zhuān)屬培養(yǎng)基，多能干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、外泌體收集使用獨(dú)立配方體系，避免通用型培養(yǎng)基對(duì)特定細(xì)胞增殖、功能維持產(chǎn)生抑制作用。

 （二）生產(chǎn)與質(zhì)控優(yōu)勢(shì)

1. 生產(chǎn)區(qū)域分區(qū)管理，細(xì)胞級(jí)試劑生產(chǎn)、分裝、密封獨(dú)立分區(qū)操作，空氣潔凈度分級(jí)管控，配套獨(dú)立無(wú)菌灌裝設(shè)備，成品全程無(wú)菌過(guò)濾處理，每批次成品同步開(kāi)展無(wú)菌、支原體、真菌細(xì)菌、內(nèi)毒素、細(xì)胞活性驗(yàn)證五項(xiàng)基礎(chǔ)檢驗(yàn)，高等級(jí)產(chǎn)品額外增加外源病毒篩查、細(xì)胞分化潛能驗(yàn)證、批次平行培養(yǎng)對(duì)照試驗(yàn)。

2. 建立標(biāo)準(zhǔn)化留樣制度，每一批次成品留存樣品，留樣存儲(chǔ)周期覆蓋產(chǎn)品完整保質(zhì)期，若用戶(hù)實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)異常，可同步調(diào)取留樣開(kāi)展平行復(fù)測(cè)，輔助定位實(shí)驗(yàn)問(wèn)題來(lái)源；所有檢驗(yàn)設(shè)備定期校準(zhǔn)，檢驗(yàn)方法形成標(biāo)準(zhǔn)化SOP文件，檢驗(yàn)人員操作流程統(tǒng)一，減少人為檢測(cè)誤差。

3. 原料采購(gòu)管控嚴(yán)格，所有生產(chǎn)使用的氨基酸、重組蛋白、緩沖鹽、保護(hù)劑均選取原料藥級(jí)別原料，供應(yīng)商資質(zhì)、原料質(zhì)檢報(bào)告完整歸檔，進(jìn)廠原料全部完成指標(biāo)復(fù)測(cè)，不合格原料不予投產(chǎn)，避免上游原料質(zhì)量波動(dòng)影響成品穩(wěn)定性。

 （三）合規(guī)配套優(yōu)勢(shì)

1. 核心產(chǎn)品具備完整備案資料，CDE、DMF備案文件、醫(yī)療器械備案憑證、ISO9001體系證書(shū)、車(chē)間GMP相關(guān)生產(chǎn)記錄模板均可向授權(quán)代理商上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司申請(qǐng)調(diào)取，適配藥企開(kāi)展工藝審計(jì)、藥品申報(bào)資料整理工作，無(wú)需用戶(hù)自行整理原料合規(guī)佐證材料。

2. 每瓶成品配套出廠質(zhì)檢報(bào)告，報(bào)告標(biāo)注該批次內(nèi)毒素?cái)?shù)值、無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果、細(xì)胞增殖驗(yàn)證數(shù)據(jù)、有效期、生產(chǎn)批號(hào)，可直接附入實(shí)驗(yàn)記錄、申報(bào)卷宗，減少用戶(hù)自行檢測(cè)、記錄整理工作量。

3. 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)完整標(biāo)注組分、適用場(chǎng)景、儲(chǔ)存條件、操作步驟、安全注意事項(xiàng)、廢棄處理規(guī)范，符合生物醫(yī)藥行業(yè)實(shí)驗(yàn)記錄、生產(chǎn)記錄書(shū)寫(xiě)規(guī)范要求。

 （四）渠道與技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢(shì)

1. 統(tǒng)一授權(quán)代理商渠道，全部產(chǎn)品統(tǒng)一由上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司對(duì)外銷(xiāo)售，價(jià)格體系、樣品政策、售后技術(shù)服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一，不存在多渠道貨源品質(zhì)差異問(wèn)題，采購(gòu)對(duì)接流程簡(jiǎn)化，樣品申請(qǐng)、批量訂貨、售后咨詢(xún)均可通過(guò)單一合作渠道完成。

2. 配套專(zhuān)屬技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)，針對(duì)干細(xì)胞擴(kuò)增、細(xì)胞凍存復(fù)蘇、外泌體提取、多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化、原代細(xì)胞分離等實(shí)操問(wèn)題提供線上方案指導(dǎo)，復(fù)雜實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景可提供標(biāo)準(zhǔn)化操作流程文檔，協(xié)助用戶(hù)優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)工藝，減少反復(fù)試錯(cuò)產(chǎn)生的試劑、時(shí)間損耗。

3. 產(chǎn)品規(guī)格分層設(shè)置，小容量規(guī)格適配實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模預(yù)實(shí)驗(yàn)、條件摸索，大容量袋裝規(guī)格適配藥企規(guī)模化細(xì)胞制備，可根據(jù)用戶(hù)使用規(guī)模靈活選型，降低小規(guī)模實(shí)驗(yàn)的采購(gòu)成本。

 三、熱門(mén)產(chǎn)品介紹

 （一）人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（無(wú)異源型）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

本產(chǎn)品為即用型完整培養(yǎng)基，無(wú)需用戶(hù)額外添加血清、基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)組分，適配人臍帶、脂肪、骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代分離、連續(xù)傳代擴(kuò)增培養(yǎng)；全程無(wú)動(dòng)物源蛋白添加，內(nèi)毒素檢測(cè)數(shù)值低于0.06EU/ml，優(yōu)于藥典常規(guī)限值；培養(yǎng)過(guò)程無(wú)需提前包被培養(yǎng)器皿，簡(jiǎn)化前期操作步驟；細(xì)胞增殖速度穩(wěn)定，正常培養(yǎng)條件下細(xì)胞可在24小時(shí)左右完成數(shù)量翻倍，長(zhǎng)期傳代過(guò)程中可維持細(xì)胞成骨、成脂、成軟骨多向分化能力，不會(huì)快速出現(xiàn)細(xì)胞衰老、分化潛能下降問(wèn)題；無(wú)酚紅版本可適配熒光成像、流式細(xì)胞檢測(cè)、藥物篩選等對(duì)指示劑存在干擾的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景，含酚紅版本便于日常肉眼觀察培養(yǎng)基酸堿狀態(tài)，兩種亞型可按需選擇；批次間細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、細(xì)胞活率差異幅度低，重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)性更好，適配需要批量平行對(duì)照、長(zhǎng)期連續(xù)性試驗(yàn)的研究項(xiàng)目。

2. 存儲(chǔ)條件

未開(kāi)封成品存儲(chǔ)環(huán)境為2℃至8℃避光冷藏，避免冷凍，冷凍會(huì)破壞內(nèi)部重組蛋白活性組分，導(dǎo)致培養(yǎng)效果下降；開(kāi)封后密封存放于2℃至8℃環(huán)境，建議4周內(nèi)使用完畢，每次取用后快速擰緊瓶蓋，減少與空氣長(zhǎng)時(shí)間接觸，防止二氧化碳流失引發(fā)pH偏移；運(yùn)輸全程采用2℃至8℃冷鏈保溫包裝，不可常溫長(zhǎng)時(shí)間轉(zhuǎn)運(yùn)。

3. 工作原理

培養(yǎng)基內(nèi)部由基礎(chǔ)無(wú)機(jī)鹽緩沖體系、必需氨基酸、維生素、重組人源白蛋白、重組細(xì)胞因子、微量元素、抗氧化保護(hù)組分共同構(gòu)成，完整覆蓋間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖所需全部營(yíng)養(yǎng)、信號(hào)調(diào)控物質(zhì)；緩沖體系穩(wěn)定維持培養(yǎng)環(huán)境pH值，適配5%二氧化碳培養(yǎng)箱環(huán)境；重組細(xì)胞因子持續(xù)刺激細(xì)胞增殖通路，抗氧化組分降低體外培養(yǎng)過(guò)程中氧化應(yīng)激損傷，減少細(xì)胞凋亡；無(wú)異源配方剔除胎牛血清中未知雜蛋白、潛在病原體，避免雜蛋白干擾細(xì)胞分泌功能與后續(xù)分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

4. 使用方法

第一步，從冷藏環(huán)境取出培養(yǎng)基，放置于37℃水浴鍋中恒溫預(yù)熱15至20分鐘，恢復(fù)至培養(yǎng)溫度，避免低溫培養(yǎng)基刺激細(xì)胞引發(fā)應(yīng)激凋亡；第二步，棄去培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)原有舊培養(yǎng)基，使用無(wú)菌PBS緩沖液輕洗細(xì)胞單層1至2次，去除殘留代謝廢物；第三步，按照培養(yǎng)器皿底面積添加對(duì)應(yīng)體積培養(yǎng)基，T25培養(yǎng)瓶添加5ml，T75培養(yǎng)瓶添加15ml，六孔板單孔添加2ml；第四步，將培養(yǎng)器皿放置于37℃、5%二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞融合度2至3天更換一次新鮮培養(yǎng)基；第五步，原代細(xì)胞分離操作時(shí)，組織消化完成離心沉淀后，直接使用本培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀鋪板，無(wú)需額外添加輔助包被試劑。

 （二）無(wú)血清細(xì)胞凍存液（治療級(jí)）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

成品為即用型液體體系，無(wú)需用戶(hù)自行混合血清、DMSO、基礎(chǔ)培養(yǎng)基，簡(jiǎn)化凍存操作流程；無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物源組分，消除動(dòng)物源病原體污染風(fēng)險(xiǎn)，適配臨床級(jí)干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、原代細(xì)胞凍存；配套低毒性冷凍保護(hù)組分，無(wú)需使用程序降溫盒，完成細(xì)胞重懸分裝后可直接放入-80℃冰箱短期存放，長(zhǎng)期保存可轉(zhuǎn)移至液氮環(huán)境；細(xì)胞復(fù)蘇后活率維持在較高區(qū)間，復(fù)蘇后細(xì)胞貼壁速度、增殖能力無(wú)明顯衰減；內(nèi)毒素?cái)?shù)值符合細(xì)胞藥物生產(chǎn)規(guī)范，可用于臨床細(xì)胞制劑凍存環(huán)節(jié)；適配絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞、懸浮免疫細(xì)胞、造血干細(xì)胞、多能干細(xì)胞，適用細(xì)胞覆蓋范圍較廣；成品無(wú)菌過(guò)濾處理，支原體、細(xì)菌真菌陰性，每批次附帶完整細(xì)胞復(fù)蘇活率驗(yàn)證數(shù)據(jù)。

2. 存儲(chǔ)條件

未開(kāi)封產(chǎn)品2℃至8℃避光冷藏保存，禁止放置于-20℃冷凍環(huán)境，低溫冷凍會(huì)改變保護(hù)劑分子結(jié)構(gòu)，降低細(xì)胞復(fù)蘇效率；開(kāi)封后密封冷藏，建議3個(gè)月內(nèi)用完，每次取用操作全程無(wú)菌，避免微生物污染；產(chǎn)品運(yùn)輸采用冷鏈保溫包裝，全程維持2℃至8℃恒溫。

3. 工作原理

體系內(nèi)包含細(xì)胞滲透性冷凍保護(hù)劑與非滲透性大分子保護(hù)組分，滲透性保護(hù)劑可自由穿過(guò)細(xì)胞膜，平衡細(xì)胞內(nèi)外滲透壓，低溫降溫過(guò)程中減少細(xì)胞內(nèi)冰晶形成，降低冰晶穿刺細(xì)胞膜造成的細(xì)胞破損；大分子非滲透保護(hù)組分附著于細(xì)胞膜外側(cè)，形成保護(hù)膜，減少降溫、升溫過(guò)程中細(xì)胞膜脂質(zhì)層損傷；緩沖鹽體系穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)外離子環(huán)境，降低低溫帶來(lái)的氧化應(yīng)激損傷；無(wú)血清配方規(guī)避血清中大分子雜蛋白在低溫下析出沉淀，減少?gòu)?fù)蘇后雜質(zhì)干擾細(xì)胞生長(zhǎng)。

4. 使用方法

第一步，細(xì)胞消化收集：貼壁細(xì)胞經(jīng)消化液脫壁后，加入常規(guī)培養(yǎng)基中和消化酶，離心去除上清；懸浮免疫細(xì)胞直接離心收集細(xì)胞沉淀，離心轉(zhuǎn)速控制在1000rpm，離心時(shí)長(zhǎng)5分鐘；第二步，棄去全部上清液體，根據(jù)細(xì)胞沉淀總量加入常溫解凍后的凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度至每毫升1×10^6至5×10^6個(gè)；第三步，充分輕柔吹打混勻細(xì)胞懸液，分裝至無(wú)菌凍存管，每管分裝體積控制在1ml以?xún)?nèi)；第四步，擰緊凍存管密封，做好細(xì)胞類(lèi)型、凍存日期標(biāo)記，直接放入-80℃冰箱靜置；短期保存可存放于-80℃環(huán)境，超過(guò)3個(gè)月長(zhǎng)期儲(chǔ)存轉(zhuǎn)移至液氮?dú)庀喹h(huán)境；第五步，細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，取出凍存管快速放入37℃水浴全融化，融化后立刻加入足量常規(guī)培養(yǎng)基稀釋凍存液保護(hù)劑，離心去除含保護(hù)劑上清，更換新鮮培養(yǎng)基鋪板培養(yǎng)。

 （三）無(wú)動(dòng)物源細(xì)胞消化液（無(wú)酚紅型）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

配方采用重組胰酶衍生物搭配EDTA緩沖體系，無(wú)豬源、牛源胰酶提取物，無(wú)外源病毒、支原體引入風(fēng)險(xiǎn)；無(wú)酚紅指示劑，不會(huì)干擾熒光標(biāo)記細(xì)胞成像、流式細(xì)胞熒光檢測(cè)、上清液蛋白定量實(shí)驗(yàn)；消化作用溫和，短時(shí)間內(nèi)可完整解離貼壁干細(xì)胞、原代細(xì)胞，不會(huì)過(guò)度損傷細(xì)胞膜表面蛋白標(biāo)志物，維持細(xì)胞原有表面抗原表達(dá)；緩沖體系適配常溫及37℃環(huán)境，脫離二氧化碳培養(yǎng)箱仍可維持穩(wěn)定pH，便于缺氧實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)運(yùn)途中細(xì)胞傳代操作；消化結(jié)束后無(wú)需高比例培養(yǎng)基中和，少量培養(yǎng)基即可終止消化活性，減少培養(yǎng)基損耗；成品無(wú)菌分裝，保質(zhì)期較長(zhǎng)，長(zhǎng)期冷藏放置不會(huì)快速失活，多次開(kāi)蓋取用后酶活衰減幅度小。

2. 存儲(chǔ)條件

未開(kāi)封產(chǎn)品-20℃避光冷凍存儲(chǔ)，避免反復(fù)凍融，單次分裝成小體積凍存管可延長(zhǎng)使用周期；短期日常使用可分裝后放置于2℃至8℃冷藏，冷藏環(huán)境下建議1個(gè)月內(nèi)使用完畢；運(yùn)輸采用干冰低溫冷鏈運(yùn)輸，避免常溫運(yùn)輸造成酶蛋白失活。

3. 工作原理

重組胰酶組分特異性切割細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、細(xì)胞間黏附蛋白，打斷細(xì)胞與培養(yǎng)板、細(xì)胞與細(xì)胞之間的連接結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞完整解離；EDTA螯合體系結(jié)合環(huán)境中二價(jià)金屬離子，抑制黏附蛋白活性，輔助提升消化解離效率；專(zhuān)用緩沖鹽穩(wěn)定消化體系pH，避免溫度變化、空氣接觸引發(fā)酸堿度波動(dòng)，保證酶活性穩(wěn)定；無(wú)動(dòng)物源重組酶體系不含雜蛋白，消化后上清無(wú)動(dòng)物源性雜質(zhì)，收集上清用于外泌體、細(xì)胞因子檢測(cè)時(shí)無(wú)背景干擾。

4. 使用方法

第一步，消化液提前取出，37℃水浴預(yù)熱至培養(yǎng)溫度；第二步，吸走培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)全部舊培養(yǎng)基，無(wú)菌PBS緩沖液清洗細(xì)胞單層1次，去除殘留血清、蛋白組分；第三步，按照培養(yǎng)器皿規(guī)格加入消化液，T25瓶添加1ml消化液，六孔板單孔添加200μl；第四步，放置于37℃培養(yǎng)箱孵育2至5分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞收縮變圓、輕拍瓶壁可脫落時(shí)停止消化；第五步，加入兩倍體積培養(yǎng)基輕柔吹打，中和消化酶活性，收集細(xì)胞懸液離心，更換新鮮培養(yǎng)基完成傳代鋪板或細(xì)胞凍存操作。

 （四）人間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體專(zhuān)用培養(yǎng)基

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

無(wú)血清、無(wú)異源完整配方，不含外源外泌體、雜蛋白，細(xì)胞培養(yǎng)后收集的上清雜質(zhì)少，大幅簡(jiǎn)化外泌體分離純化步驟；可穩(wěn)定維持間充質(zhì)干細(xì)胞活性，長(zhǎng)期上清收集階段細(xì)胞凋亡比例低，細(xì)胞持續(xù)分泌外泌體的周期更長(zhǎng)；批次間營(yíng)養(yǎng)組分、抗氧化物質(zhì)含量統(tǒng)一，不同批次培養(yǎng)得到的外泌體粒徑分布、標(biāo)志物表達(dá)水平波動(dòng)幅度小；不含酚紅，適配外泌體熒光標(biāo)記、納米顆粒追蹤檢測(cè)、電鏡樣本制備等后續(xù)檢測(cè)；低內(nèi)毒素配方，收集的外泌體可用于細(xì)胞給藥、動(dòng)物體內(nèi)功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，減少內(nèi)毒素引發(fā)的炎癥干擾；無(wú)需額外添加細(xì)胞因子，開(kāi)蓋預(yù)熱后可直接用于細(xì)胞上清收集階段培養(yǎng)，操作流程簡(jiǎn)化。

2. 存儲(chǔ)條件

未開(kāi)封成品2℃至8℃避光冷藏，禁止冷凍；開(kāi)封后密封冷藏存放，建議3周內(nèi)用完，每次取用快速密封，防止pH改變；全程冷鏈2℃至8℃運(yùn)輸，不可常溫放置超過(guò)4小時(shí)。

3. 工作原理

培養(yǎng)基內(nèi)低蛋白、無(wú)外源囊泡配方從源頭排除外界外泌體雜質(zhì)干擾，專(zhuān)用抗氧化組分降低細(xì)胞培養(yǎng)氧化應(yīng)激，減少細(xì)胞碎片、凋亡小體產(chǎn)生；平衡型營(yíng)養(yǎng)供給維持細(xì)胞基礎(chǔ)代謝，同時(shí)調(diào)控細(xì)胞囊泡分泌通路，提升細(xì)胞外泌體分泌總量；緩沖體系長(zhǎng)期穩(wěn)定維持pH，適合48至72小時(shí)無(wú)換液持續(xù)培養(yǎng)收集上清，不會(huì)因長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)出現(xiàn)酸堿失衡引發(fā)細(xì)胞壞死。

4. 使用方法

第一步，完成干細(xì)胞常規(guī)擴(kuò)增，待細(xì)胞融合度達(dá)到70%至80%時(shí)，吸除原有擴(kuò)增培養(yǎng)基，無(wú)菌PBS緩沖液清洗細(xì)胞單層2次，去除殘留血清及外源雜蛋白；第二步，37℃預(yù)熱本款外泌體培養(yǎng)基，按器皿規(guī)格添加對(duì)應(yīng)體積液體；第三步，放置于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)48至72小時(shí)，期間不更換培養(yǎng)基；第四步，到期后完整收集全部上清液體，通過(guò)無(wú)菌濾器過(guò)濾去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片，濾液用于超速離心、層析法分離純化外泌體；第五步，上清收集完成后，更換常規(guī)干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，用于后續(xù)多批次上清采集。

 （五）人間充質(zhì)干細(xì)胞三系分化試劑盒（成骨/成脂/成軟骨）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

試劑盒配套分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基、維持培養(yǎng)基、專(zhuān)用染色試劑，完整覆蓋干細(xì)胞多向分化誘導(dǎo)、培養(yǎng)、鑒定全流程；無(wú)血清無(wú)異源配方，誘導(dǎo)分化過(guò)程穩(wěn)定，同批次細(xì)胞分化陽(yáng)性比例均勻；分套獨(dú)立分裝，成骨、成脂、成軟骨分化試劑分開(kāi)包裝，可單獨(dú)選購(gòu)單一分化體系，也可成套采購(gòu)；誘導(dǎo)周期標(biāo)準(zhǔn)化，按照說(shuō)明書(shū)操作可固定周期完成分化，無(wú)需長(zhǎng)期條件摸索；染色試劑特異性強(qiáng)，分化細(xì)胞染色后對(duì)比度清晰，普通光學(xué)顯微鏡即可完成觀察拍照；內(nèi)毒素指標(biāo)達(dá)標(biāo)，誘導(dǎo)后的分化細(xì)胞可用于轉(zhuǎn)錄組、蛋白組測(cè)序等分子機(jī)制研究，無(wú)外源雜質(zhì)干擾檢測(cè)結(jié)果。

2. 存儲(chǔ)條件

分化培養(yǎng)基組分2℃至8℃避光冷藏，禁止冷凍；染色試劑-20℃避光冷凍保存，短期使用可分裝冷藏；整套產(chǎn)品冷鏈運(yùn)輸，分化培養(yǎng)基2-8℃保溫，染色試劑干冰低溫運(yùn)輸。

3. 工作原理

成骨分化培養(yǎng)基添加礦化誘導(dǎo)因子、糖皮質(zhì)激素、磷酸底物，調(diào)控干細(xì)胞向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)鈣鹽沉積形成礦化結(jié)節(jié)；成脂分化培養(yǎng)基包含脂類(lèi)合成調(diào)控因子，誘導(dǎo)細(xì)胞胞內(nèi)脂滴合成積累；成軟骨分化培養(yǎng)基添加軟骨基質(zhì)合成相關(guān)細(xì)胞因子，刺激細(xì)胞分泌Ⅱ型膠原、蛋白多糖等軟骨特異性基質(zhì)；專(zhuān)用染色試劑可特異性結(jié)合礦化鈣鹽、胞內(nèi)脂滴、軟骨基質(zhì)多糖，通過(guò)顯色反應(yīng)直觀區(qū)分分化陽(yáng)性細(xì)胞，完成干細(xì)胞分化潛能定性、半定量鑒定。

4. 使用方法

以成骨分化流程為例：第一步，間充質(zhì)干細(xì)胞鋪板培養(yǎng)至細(xì)胞融合度達(dá)到60%，棄去擴(kuò)增培養(yǎng)基，更換成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基；第二步，每3天更換一次新鮮誘導(dǎo)培養(yǎng)基，持續(xù)誘導(dǎo)14至21天；第三步，誘導(dǎo)周期結(jié)束后棄培養(yǎng)基，多聚甲醛固定細(xì)胞，洗滌后加入成骨染色試劑室溫染色；第四步，清水沖洗多余染液，顯微鏡下觀察礦化結(jié)節(jié)顯色情況，記錄分化陽(yáng)性比例；成脂、成軟骨分化操作流程同理，嚴(yán)格按照試劑盒標(biāo)注的誘導(dǎo)周期、換液頻率、染色時(shí)長(zhǎng)完成操作。

 四、產(chǎn)品可解決實(shí)驗(yàn)中各類(lèi)問(wèn)題

 （一）干細(xì)胞擴(kuò)增相關(guān)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題

1. 傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)基批次差異大，多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)無(wú)法對(duì)齊

常規(guī)胎牛血清受產(chǎn)地、批次、動(dòng)物個(gè)體差異影響，生長(zhǎng)因子、蛋白組分含量波動(dòng)明顯，同一細(xì)胞系不同批次培養(yǎng)擴(kuò)增倍數(shù)差距較大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以重復(fù)。埃澤思無(wú)異源無(wú)血清培養(yǎng)基全部組分配比標(biāo)準(zhǔn)化，重組蛋白、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量統(tǒng)一，批次平行對(duì)照細(xì)胞增殖幅度偏差縮小，長(zhǎng)期連續(xù)性課題、批量藥物篩選實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性提升。

2. 原代干細(xì)胞分離鋪板后貼壁率低，細(xì)胞大量凋亡

普通基礎(chǔ)培養(yǎng)基缺少干細(xì)胞特異性生長(zhǎng)調(diào)控因子，原代組織細(xì)胞脫離體內(nèi)微環(huán)境后易發(fā)生應(yīng)激死亡，鋪板存活細(xì)胞數(shù)量少。品牌專(zhuān)用干細(xì)胞培養(yǎng)基添加適配原代細(xì)胞的抗氧化組分與信號(hào)調(diào)控因子，組織消化后直接重懸鋪板，無(wú)需額外包被處理，細(xì)胞貼壁數(shù)量、存活比例明顯提升，減少組織樣本浪費(fèi)。

3. 長(zhǎng)期傳代后干細(xì)胞分化潛能快速丟失，三系分化陽(yáng)性率持續(xù)下降

血清內(nèi)未知抑制組分、氧化損傷會(huì)損傷干細(xì)胞干性，連續(xù)傳代5至10代后細(xì)胞衰老、分化能力減弱。品牌培養(yǎng)基配套抗氧化保護(hù)體系，持續(xù)維持細(xì)胞干性相關(guān)通路活性，連續(xù)傳代過(guò)程中可穩(wěn)定保持成骨、成脂、成軟骨分化能力，滿(mǎn)足長(zhǎng)期傳代、基因編輯后細(xì)胞功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)需求。

4. 培養(yǎng)基含酚紅，后續(xù)熒光檢測(cè)、流式實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)高背景信號(hào)

常規(guī)培養(yǎng)基添加酚紅指示劑，會(huì)吸收特定波段激發(fā)光，造成熒光檢測(cè)背景值偏高，微弱熒光信號(hào)難以識(shí)別。品牌推出無(wú)酚紅亞型培養(yǎng)基，規(guī)避指示劑熒光干擾，活細(xì)胞成像、流式細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè)、共聚焦顯微觀測(cè)可直接使用培養(yǎng)細(xì)胞，無(wú)需更換緩沖液洗滌，簡(jiǎn)化操作步驟。

 （二）細(xì)胞凍存與復(fù)蘇相關(guān)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題

1. 自行配制凍存液配比難以把控，復(fù)蘇后細(xì)胞活率偏低

實(shí)驗(yàn)室自制凍存液依靠人工配比DMSO、血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基，配比誤差、混合不均會(huì)造成細(xì)胞低溫?fù)p傷，復(fù)蘇后活率不足70%，大量細(xì)胞無(wú)法貼壁增殖。埃澤思治療級(jí)無(wú)血清凍存液工業(yè)化標(biāo)準(zhǔn)化配比，保護(hù)組分分布均勻，無(wú)需自行調(diào)配，常規(guī)干細(xì)胞復(fù)蘇活率可維持較高水平，減少珍貴原代細(xì)胞、基因改造細(xì)胞損耗。

2. 含血清凍存液存在外源病原體污染風(fēng)險(xiǎn)，無(wú)法用于臨床細(xì)胞制劑制備

胎牛血清中存在未全檢出的病毒、支原體潛在隱患，使用含血清凍存液凍存的細(xì)胞不能滿(mǎn)足細(xì)胞藥物申報(bào)、臨床細(xì)胞制備合規(guī)要求。品牌凍存液全程無(wú)動(dòng)物源組分，配套完整外源因子檢測(cè)報(bào)告，產(chǎn)品完成CDE備案，適配臨床前、臨床階段細(xì)胞凍存工作，可直接用于申報(bào)卷宗原料資料整理。

3. 凍存操作需要程序降溫盒，操作流程繁瑣，批量?jī)龃婧臅r(shí)久

傳統(tǒng)凍存方案需要梯度降溫程序，購(gòu)置程序降溫盒、放置-80℃過(guò)夜，大批量細(xì)胞凍存時(shí)占用設(shè)備、耗時(shí)較長(zhǎng)。本款凍存液配方優(yōu)化低溫保護(hù)體系，分裝完成后可直接放入-80℃冰箱，無(wú)需梯度降溫步驟，藥企規(guī)模化細(xì)胞制備、實(shí)驗(yàn)室大批量樣本凍存均可簡(jiǎn)化操作流程，節(jié)約人工與設(shè)備資源。

 （三）細(xì)胞消化傳代相關(guān)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題

1. 普通動(dòng)物源胰酶消化力度難以控制，干細(xì)胞細(xì)胞膜表面抗原被破壞

市售豬源胰酶消化活性波動(dòng)大，長(zhǎng)時(shí)間消化會(huì)分解干細(xì)胞表面CD29、CD44等特異性標(biāo)志物，流式鑒定時(shí)陽(yáng)性比例偏低。埃澤思無(wú)動(dòng)物源重組消化酶作用溫和，可控性強(qiáng)，短時(shí)間內(nèi)完成細(xì)胞解離，不會(huì)破壞細(xì)胞膜表面蛋白，消化后細(xì)胞可直接用于流式表型鑒定實(shí)驗(yàn)，無(wú)需額外修復(fù)處理。

2. 消化液含酚紅，消化收集的細(xì)胞上清無(wú)法用于外泌體、細(xì)胞因子檢測(cè)

酚紅會(huì)干擾蛋白定量、囊泡粒徑檢測(cè)的光學(xué)讀數(shù)，收集消化后上清開(kāi)展外泌體研究時(shí)需要多次透析去除指示劑。無(wú)酚紅型消化液不含顯色雜質(zhì)，消化后上清過(guò)濾可直接開(kāi)展后續(xù)分離檢測(cè)，減少樣本前處理步驟，避免透析過(guò)程中外泌體、細(xì)胞因子損耗。

3. 胰酶產(chǎn)品批次酶活差異大，消化時(shí)間難以統(tǒng)一，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差

動(dòng)物源胰酶受原料批次影響酶活浮動(dòng)，同一細(xì)胞每次消化時(shí)長(zhǎng)需要反復(fù)調(diào)整，人為操作誤差大。重組消化液酶活標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，不同批次消化所需時(shí)長(zhǎng)基本統(tǒng)一，標(biāo)準(zhǔn)化SOP可長(zhǎng)期沿用，多人操作、多實(shí)驗(yàn)室平行實(shí)驗(yàn)時(shí)操作條件保持一致。

 （四）外泌體提取與研究相關(guān)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題

1. 常規(guī)含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，上清內(nèi)混雜大量外源外泌體，純化難度高

胎牛血清自帶大量牛源外泌體，細(xì)胞培養(yǎng)收集的上清中雜囊泡數(shù)量遠(yuǎn)超細(xì)胞自身分泌外泌體，超速離心后樣本雜質(zhì)多，NTA檢測(cè)粒徑分布雜亂，電鏡下背景雜蛋白嚴(yán)重。品牌外泌體專(zhuān)用培養(yǎng)基無(wú)外源囊泡、無(wú)動(dòng)物雜蛋白，收集上清僅含干細(xì)胞自身分泌外泌體，純化步驟簡(jiǎn)化，檢測(cè)圖譜背景干凈，數(shù)據(jù)區(qū)分度更高。

2. 長(zhǎng)時(shí)間收集上清過(guò)程中細(xì)胞大量凋亡，外泌體產(chǎn)量偏低

普通培養(yǎng)基缺少長(zhǎng)效抗氧化組分，48小時(shí)無(wú)換液培養(yǎng)后細(xì)胞出現(xiàn)大面積凋亡，細(xì)胞碎片、凋亡小體混入上清，有效外泌體產(chǎn)出量下降。專(zhuān)用外泌體培養(yǎng)基配套長(zhǎng)效營(yíng)養(yǎng)與抗氧化體系，72小時(shí)靜置培養(yǎng)細(xì)胞存活狀態(tài)穩(wěn)定，外泌體分泌總量提升，減少細(xì)胞培養(yǎng)耗材、樣本采集時(shí)間成本。

3. 外泌體樣本用于動(dòng)物體內(nèi)功能驗(yàn)證時(shí)，血清內(nèi)毒素引發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物炎癥反應(yīng)

血清中內(nèi)毒素?zé)o法通過(guò)離心全去除，尾靜脈注射外泌體樣本后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)發(fā)熱、局部炎癥，干擾體內(nèi)功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本款培養(yǎng)基內(nèi)毒素?cái)?shù)值嚴(yán)格管控，收集的外泌體樣本內(nèi)毒素含量低，動(dòng)物給藥后炎癥干擾減弱，體內(nèi)功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度提升。

 （五）干細(xì)胞分化鑒定相關(guān)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題

1. 自行搭配分化誘導(dǎo)試劑組分比例失衡，分化陽(yáng)性率不穩(wěn)定

實(shí)驗(yàn)室自行購(gòu)買(mǎi)糖皮質(zhì)激素、磷酸鹽、脂類(lèi)誘導(dǎo)劑調(diào)配分化培養(yǎng)基，組分濃度把控難度高，不同批次誘導(dǎo)分化陽(yáng)性比例差距明顯，三系分化對(duì)比實(shí)驗(yàn)無(wú)法形成有效對(duì)照。成套分化試劑盒預(yù)混標(biāo)準(zhǔn)化誘導(dǎo)組分，每批次配比統(tǒng)一，干細(xì)胞誘導(dǎo)分化陽(yáng)性比例穩(wěn)定，成骨礦化結(jié)節(jié)、胞內(nèi)脂滴、軟骨基質(zhì)生成量均勻，便于分化潛能定量對(duì)比分析。

2. 分化后染色試劑顯色淺，顯微鏡下難以區(qū)分陰性、陽(yáng)性細(xì)胞

普通商用染色試劑特異性弱，細(xì)胞基質(zhì)顯色對(duì)比度低，低分化樣本無(wú)法清晰識(shí)別，拍照留存實(shí)驗(yàn)記錄效果差。試劑盒配套專(zhuān)用染色液，靶向結(jié)合分化特異性基質(zhì)，顯色深度充足，普通光學(xué)顯微鏡即可清晰觀測(cè)，實(shí)驗(yàn)圖片可直接用于課題論文配圖。

3. 分化試劑成分不清晰，開(kāi)展轉(zhuǎn)錄組、蛋白組測(cè)序時(shí)存在雜蛋白干擾

動(dòng)物源分化添加劑會(huì)引入大量外源蛋白，細(xì)胞裂解后雜蛋白富集，測(cè)序、質(zhì)譜檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)大量無(wú)關(guān)峰值，增加數(shù)據(jù)分析難度。試劑盒全套試劑無(wú)異源動(dòng)物組分，細(xì)胞裂解樣本雜質(zhì)少，組學(xué)測(cè)序數(shù)據(jù)背景噪音低，減少數(shù)據(jù)篩選、剔除無(wú)用峰值的工作量。

 （六）細(xì)胞藥物申報(bào)、工藝審計(jì)相關(guān)問(wèn)題

1. 試劑缺少完整質(zhì)檢、備案資料，藥企工藝審計(jì)、藥品申報(bào)資料缺失

市面多數(shù)科研級(jí)試劑僅提供簡(jiǎn)單說(shuō)明書(shū)，無(wú)批次質(zhì)檢報(bào)告、合規(guī)備案文件，藥企開(kāi)展CDE申報(bào)、第三方審計(jì)時(shí)無(wú)法提供原料安全佐證材料。埃澤思全系列合規(guī)級(jí)產(chǎn)品配套CDE、DMF備案文件，每批次出具完整出廠質(zhì)檢報(bào)告，可通過(guò)授權(quán)代理商上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司調(diào)取全套資料，直接納入申報(bào)卷宗，節(jié)省資料整理周期。

2. 產(chǎn)品無(wú)完整溯源記錄，生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)控流程無(wú)法向?qū)徳u(píng)機(jī)構(gòu)展示

普通試劑廠商不留存完整生產(chǎn)、檢驗(yàn)原始記錄，審評(píng)機(jī)構(gòu)核查原料質(zhì)控流程時(shí)無(wú)法提供佐證。企業(yè)完整留存每一批次原料采購(gòu)記錄、生產(chǎn)中控記錄、成品檢驗(yàn)原始數(shù)據(jù)，可配合藥企完成工藝溯源審計(jì)，滿(mǎn)足藥品監(jiān)管相關(guān)核查要求。

 五、采購(gòu)產(chǎn)品常見(jiàn)疑問(wèn)及完整解答

 疑問(wèn)1：所有產(chǎn)品均只能通過(guò)上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司采購(gòu)嗎？

解答：AppliedCell上海埃澤思生物僅授權(quán)上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司作為授權(quán)代理商，品牌全部標(biāo)準(zhǔn)化成品、試劑盒、配套試劑均由該企業(yè)對(duì)外銷(xiāo)售。用戶(hù)樣品申領(lǐng)、批量訂貨、報(bào)價(jià)咨詢(xún)、售后技術(shù)對(duì)接需聯(lián)系該代理商，通過(guò)非授權(quán)渠道采購(gòu)的產(chǎn)品無(wú)法保障批次品質(zhì)、配套質(zhì)檢資料、售后技術(shù)服務(wù)，出現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題無(wú)法提供復(fù)測(cè)、退換貨支持。

 疑問(wèn)2：科研級(jí)、臨床前合規(guī)級(jí)、治療級(jí)三類(lèi)產(chǎn)品核心區(qū)別是什么，如何匹配自身實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景？

解答：三類(lèi)產(chǎn)品基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)核心效果保持一致，差異集中在質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、合規(guī)文件、內(nèi)毒素及外源因子檢測(cè)項(xiàng)目：

1. 科研級(jí)：適配高校、科研院所基礎(chǔ)機(jī)制研究、細(xì)胞條件摸索實(shí)驗(yàn)，完成基礎(chǔ)無(wú)菌、支原體、細(xì)胞活性檢測(cè)，配套簡(jiǎn)易出廠報(bào)告，無(wú)藥品相關(guān)備案文件，不建議用于細(xì)胞藥物臨床前、臨床制備環(huán)節(jié)；

2. 臨床前合規(guī)級(jí)：適配藥企藥物篩選、動(dòng)物藥效試驗(yàn)，增加外源病毒、批次穩(wěn)定性驗(yàn)證，可提供完整質(zhì)檢報(bào)告，無(wú)CDE、DMF備案資料，僅用于體外細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，不適合臨床細(xì)胞制劑生產(chǎn)；

3. 治療級(jí)：配套CDE、FDA DMF備案文件，全套外源因子、內(nèi)毒素、細(xì)胞分化潛能多重檢測(cè)，生產(chǎn)全程遵循GMP指導(dǎo)規(guī)范，可用于臨床級(jí)細(xì)胞制備、細(xì)胞藥物IND申報(bào)，藥企工藝審計(jì)、審評(píng)核查可直接使用全套佐證資料。

用戶(hù)僅開(kāi)展基礎(chǔ)科研課題可選擇科研級(jí)；藥企體外篩選、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選擇臨床前合規(guī)級(jí)；涉及臨床細(xì)胞制備、新藥申報(bào)必須選用治療級(jí)系列產(chǎn)品。

 疑問(wèn)3：無(wú)血清培養(yǎng)基開(kāi)封后出現(xiàn)少量渾濁，是否代表產(chǎn)品失效無(wú)法使用？

解答：分兩種情況區(qū)分判斷，不可直接判定報(bào)廢：

1. 低溫存儲(chǔ)后出現(xiàn)細(xì)微白色絮狀沉淀：培養(yǎng)基中重組蛋白組分低溫下溶解度下降析出沉淀，將培養(yǎng)基37℃水浴充分搖晃混勻后，沉淀全溶解、液體恢復(fù)澄清，無(wú)異味、無(wú)霉菌菌絲，產(chǎn)品活性不受影響，可正常使用，屬于物理可逆析出現(xiàn)象；

2. 液體渾濁伴隨白色、綠色霉菌團(tuán)塊、異味、分層現(xiàn)象：代表開(kāi)封操作時(shí)引入微生物污染，重組蛋白被微生物分解破壞，細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)出現(xiàn)大面積污染、凋亡，需直接廢棄，不可繼續(xù)使用。

日常存放時(shí)盡量減少頻繁開(kāi)蓋，每次取用后快速密封冷藏，可降低蛋白析出、污染概率。

 疑問(wèn)4：凍存液未使用程序降溫盒，直接放入-80℃后復(fù)蘇細(xì)胞活率偏低，是什么原因？

解答：存在三類(lèi)常見(jiàn)誘因，可逐一排查：

1. 細(xì)胞重懸密度不適配：細(xì)胞密度低于每毫升5×10^5個(gè)，細(xì)胞保護(hù)組分無(wú)法均勻包裹單個(gè)細(xì)胞，低溫?fù)p傷加劇，建議調(diào)整細(xì)胞密度至每毫升1×10^6至5×10^6區(qū)間；

2. 凍存管未全密封，-80℃環(huán)境下水汽滲入稀釋保護(hù)組分：凍存管螺紋擰緊后可纏繞封口膜密封，避免水汽進(jìn)入破壞配比；

3. 凍存液長(zhǎng)期冷藏放置超過(guò)保質(zhì)期，保護(hù)劑活性衰減：核對(duì)產(chǎn)品保質(zhì)期，超期產(chǎn)品保護(hù)效果下降，建議更換新批次凍存液重新凍存。

排除以上因素后，本款凍存液無(wú)需程序降溫即可達(dá)到穩(wěn)定復(fù)蘇效果。

 疑問(wèn)5：無(wú)動(dòng)物源細(xì)胞消化液消化干細(xì)胞后，流式檢測(cè)表面標(biāo)志物陽(yáng)性率下降，該如何調(diào)整操作？

解答：該現(xiàn)象多由消化孵育時(shí)長(zhǎng)過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致，配套標(biāo)準(zhǔn)化調(diào)整方案：

1. 縮短消化孵育時(shí)間，干細(xì)胞消化控制在2至3分鐘，顯微鏡下細(xì)胞剛變圓立刻加入培養(yǎng)基終止反應(yīng)，避免消化酶持續(xù)分解細(xì)胞膜表面抗原；

2. 終止消化后離心洗滌步驟增加一次，使用預(yù)冷PBS緩沖液重懸洗滌細(xì)胞，快速降低消化酶活性；

3. 若細(xì)胞粘連程度較高，可將消化液37℃預(yù)熱時(shí)間縮短至10分鐘，降低酶活釋放速度，溫和解離細(xì)胞，減少抗原降解。

 疑問(wèn)6：外泌體培養(yǎng)基收集的上清NTA檢測(cè)顆粒數(shù)量偏少，需要調(diào)整哪些培養(yǎng)條件？

解答：四項(xiàng)常規(guī)調(diào)整方向，按順序優(yōu)化即可提升外泌體產(chǎn)出：

1. 鋪板細(xì)胞融合度控制在70%至80%，融合度超過(guò)90%細(xì)胞接觸抑制增強(qiáng)，分泌活性下降；融合度低于50%細(xì)胞總量不足，囊泡產(chǎn)出總量偏低；

2. 上清收集時(shí)長(zhǎng)固定為48至72小時(shí)，培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)不足細(xì)胞分泌量未達(dá)到峰值，超過(guò)72小時(shí)細(xì)胞凋亡比例升高，雜質(zhì)增多；

3. 培養(yǎng)基使用前充分37℃預(yù)熱，低溫培養(yǎng)基會(huì)抑制細(xì)胞代謝與囊泡分泌通路；

4. 收集上清全程無(wú)菌操作，若培養(yǎng)過(guò)程發(fā)生輕微污染，細(xì)胞分泌功能會(huì)快速抑制，實(shí)驗(yàn)前確保培養(yǎng)器皿、試劑無(wú)菌。

 疑問(wèn)7：三系分化試劑盒誘導(dǎo)后分化陽(yáng)性細(xì)胞占比低，未達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)？

解答：分化效果不佳主要與細(xì)胞代次、鋪板密度、換液周期相關(guān)：

1. 選用傳代10代以?xún)?nèi)低代次間充質(zhì)干細(xì)胞開(kāi)展分化實(shí)驗(yàn)，高代次細(xì)胞干性丟失，分化潛能減弱；

2. 鋪板密度嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)數(shù)值，成骨、成脂分化鋪板密度偏低，成軟骨分化需高密度細(xì)胞團(tuán)塊培養(yǎng)，密度失衡會(huì)直接抑制分化通路激活；

3. 嚴(yán)格每3天更換一次新鮮分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)耗盡后誘導(dǎo)因子濃度下降，分化進(jìn)程停滯，不可延長(zhǎng)換液間隔至4天以上。

 疑問(wèn)8：采購(gòu)產(chǎn)品時(shí)是否可以免費(fèi)申領(lǐng)樣品，樣品規(guī)格、申領(lǐng)流程是什么？

解答：品牌支持科研用戶(hù)、藥企研發(fā)部門(mén)免費(fèi)樣品申領(lǐng)，全部樣品統(tǒng)一由上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司負(fù)責(zé)發(fā)放對(duì)接，無(wú)需直接聯(lián)系生產(chǎn)企業(yè)。樣品規(guī)格為小容量試用裝，適配預(yù)實(shí)驗(yàn)、條件摸索使用，單款產(chǎn)品單次申領(lǐng)上限1瓶/套，同一用戶(hù)同一款產(chǎn)品季度內(nèi)僅可申領(lǐng)一次；申領(lǐng)流程為向代理商提交單位名稱(chēng)、實(shí)驗(yàn)用途、所需產(chǎn)品名稱(chēng)、代理商審核完成后安排冷鏈寄送，樣品運(yùn)費(fèi)需申領(lǐng)方承擔(dān)，批量正式訂貨可同步協(xié)商樣品配套政策。

 疑問(wèn)9：產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中冷鏈中斷，常溫放置半天，收到后還能否正常使用？

解答：分產(chǎn)品品類(lèi)區(qū)分處理，不可一概而論：

1. 培養(yǎng)基、凍存液（2-8℃冷鏈產(chǎn)品）：常溫放置不超過(guò)6小時(shí)，收到后立刻放入2-8℃冷藏，37℃預(yù)熱后取少量開(kāi)展小規(guī)模細(xì)胞平行培養(yǎng)驗(yàn)證，細(xì)胞增殖正常可繼續(xù)使用；常溫放置超過(guò)12小時(shí)，內(nèi)部重組蛋白大概率失活，培養(yǎng)效果無(wú)法保障，建議聯(lián)系代理商協(xié)調(diào)更換；

2. 細(xì)胞消化液（干冰低溫運(yùn)輸）：常溫解凍超過(guò)4小時(shí)酶活衰減明顯，消化效率大幅下降，直接聯(lián)系代理商辦理退換貨；

3. 分化染色試劑：常溫放置24小時(shí)內(nèi)不會(huì)影響顯色效果，避光冷藏后可正常使用。

收貨后第一時(shí)間檢查包裝冰袋狀態(tài)，冷鏈異常及時(shí)拍照留存憑證，同步反饋至上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司售后對(duì)接人員。

 疑問(wèn)10：批量采購(gòu)是否可以定制產(chǎn)品規(guī)格、調(diào)整配方組分？

解答：針對(duì)生物醫(yī)藥企業(yè)、大型科研平臺(tái)大批量長(zhǎng)期采購(gòu)需求，企業(yè)支持定制化服務(wù)，全部定制需求由上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司統(tǒng)一收集對(duì)接技術(shù)團(tuán)隊(duì)評(píng)估：

1. 規(guī)格定制：現(xiàn)有成品可調(diào)整分裝體積，適配企業(yè)規(guī)模化細(xì)胞制備的大容量袋裝、大瓶裝規(guī)格，定制起訂量存在低標(biāo)準(zhǔn)；

2. 配方微調(diào)：根據(jù)用戶(hù)細(xì)胞類(lèi)型、申報(bào)需求調(diào)整營(yíng)養(yǎng)組分濃度、剔除特定添加劑，定制配方完成后出具專(zhuān)屬質(zhì)檢報(bào)告，定制周期根據(jù)配方調(diào)試難度確定；

3. OEM代工：具備穩(wěn)定采購(gòu)量的合作方可提供自有品牌包裝代工生產(chǎn)，全套合規(guī)備案資料同步配套。

高校小規(guī)模單次采購(gòu)僅提供現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)格，暫不開(kāi)放配方、分裝定制服務(wù)。

 疑問(wèn)11：產(chǎn)品保質(zhì)期多久，開(kāi)封后存儲(chǔ)期限和完整保質(zhì)期是否一致？

解答：不同品類(lèi)成品完整未開(kāi)封保質(zhì)期存在區(qū)分：

1. 干細(xì)胞培養(yǎng)基、外泌體培養(yǎng)基完整保質(zhì)期6個(gè)月，2-8℃避光冷藏；開(kāi)封后建議4周內(nèi)用完；

2. 治療級(jí)無(wú)血清細(xì)胞凍存液完整保質(zhì)期12個(gè)月，2-8℃冷藏，開(kāi)封后3個(gè)月內(nèi)使用完畢；

3. 無(wú)動(dòng)物源細(xì)胞消化液冷凍存儲(chǔ)完整保質(zhì)期24個(gè)月，分裝冷藏后1個(gè)月內(nèi)用完；

4. 三系分化試劑盒誘導(dǎo)培養(yǎng)基保質(zhì)期6個(gè)月，染色試劑冷凍存儲(chǔ)保質(zhì)期18個(gè)月。

所有開(kāi)封后存儲(chǔ)期限均短于完整未開(kāi)封保質(zhì)期，開(kāi)封后試劑與空氣接觸，活性組分緩慢衰減，超出建議開(kāi)封使用周期會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)效果下降、分化陽(yáng)性率降低等問(wèn)題，不建議超期使用。

 疑問(wèn)12：產(chǎn)品配套的質(zhì)檢報(bào)告、備案文件丟失，如何重新獲取？

解答：用戶(hù)可聯(lián)系授權(quán)代理商上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司，提供產(chǎn)品采購(gòu)訂單編號(hào)、產(chǎn)品生產(chǎn)批號(hào)，代理商后臺(tái)調(diào)取對(duì)應(yīng)批次全套電子文件，包含出廠質(zhì)檢報(bào)告、產(chǎn)品備案掃描件、體系資質(zhì)證書(shū)，通過(guò)線上渠道發(fā)送至用戶(hù)；紙質(zhì)版文件可同步申請(qǐng)隨下一批訂貨配套寄送，無(wú)需額外費(fèi)用。所有批次文件留存，只要提供準(zhǔn)確批號(hào)均可隨時(shí)調(diào)取，無(wú)調(diào)取時(shí)間限制。

 疑問(wèn)13：不同品牌培養(yǎng)基、消化液、凍存液能否和埃澤思產(chǎn)品混合搭配使用？

解答：不建議跨品牌試劑混合搭配，不同廠商配方緩沖體系、滲透壓、保護(hù)劑組分存在差異，混合后體系酸堿平衡、離子濃度失衡，會(huì)引發(fā)細(xì)胞大面積凋亡、增殖停滯、分化失敗等實(shí)驗(yàn)問(wèn)題。整套細(xì)胞培養(yǎng)流程建議統(tǒng)一選用AppliedCell配套試劑，培養(yǎng)基、消化液、凍存液、分化試劑盒配方體系相互適配，實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性更好；若因特殊實(shí)驗(yàn)需求混用，需要設(shè)置多組平行對(duì)照，驗(yàn)證細(xì)胞活性無(wú)異常后再開(kāi)展正式實(shí)驗(yàn)。

 疑問(wèn)14：使用產(chǎn)品過(guò)程中細(xì)胞出現(xiàn)不明原因污染，如何區(qū)分是試劑本身污染還是操作引入污染？

解答：配套區(qū)分檢測(cè)方法，快速定位污染來(lái)源：

1. 取未開(kāi)封同批次全新試劑，直接鋪入空白培養(yǎng)瓶，不加細(xì)胞，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)7天，觀察培養(yǎng)基是否渾濁、出現(xiàn)菌落；空白試劑無(wú)菌無(wú)渾濁，說(shuō)明污染為操作、耗材、細(xì)胞樣本引入；空白試劑出現(xiàn)霉菌、細(xì)菌渾濁，代表該批次試劑存在污染，聯(lián)系代理商辦理退換；

2. 同步開(kāi)展支原體檢測(cè)，若空白試劑支原體陽(yáng)性，直接判定試劑批次問(wèn)題；僅細(xì)胞培養(yǎng)樣本支原體陽(yáng)性，空白試劑陰性，為實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境、細(xì)胞源攜帶污染。

企業(yè)每一批次成品出廠均完成無(wú)菌、支原體全檢，正常全新未開(kāi)封成品不會(huì)存在微生物污染問(wèn)題。

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